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磷酸化后修飾
技術概述
磷酸化修飾
是生物體內重要的共價修飾方式之一,與信號轉導、細胞周期、生長發育以及癌癥機理等諸多生物學問題密切相關。鑒定蛋白質磷酸化位點有助于闡明蛋白質磷酸化的機制與生物學功能。目前,質譜分析是進行蛋白質磷酸化較為重要的方法之一。
技術原理
蛋白樣品中,發生磷酸化的蛋白質和肽段含量很低,且存在各種非磷酸化肽段和無機鹽的干擾,致使檢測磷酸化蛋白和磷肽段非常困難。
TiO2是比較常用、發展較為成熟的富集磷酸化蛋白/肽段的一種方法。在酸性條件下,TiO2表面帶正電,可以與磷酸化肽發生靜電作用而達到吸附的目的。樣品經酶解后,用TiO2微球對磷酸化肽段進行富集,富集后的產物由高精度質譜分析,并通過專業軟件完成數據檢索。
另外,TiO2富集結合
itraq
標記,二甲基標記等蛋白質定量方法,還可以進行定量磷酸化蛋白質組分析
。
技術優勢
TiO2富集效率高達95%,可提高修飾肽段檢測效率;
基于高精度的
質譜分析
,精確鑒定修飾位點;
實驗流程
應用領域
疾病機理研究; 個性化醫療; 農業品種改良
樣品要求
蛋白質提取物:濃度 >1μg/μl,蛋白質總量 >600μg;
細胞樣品:細胞量>107;
組織樣品:動物、微生物組織濕重>20mg
植物鮮嫩組織>200mg;
體液樣品:血液體積>1ml
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