技術原理
蛋白質印跡(western blot, WB)是蛋白質組學分析中常規技術,實驗原理就是在電場作用下,
通過凝膠電泳將蛋白質樣品按照分子量大小不同進行分離;隨后將凝膠內蛋白轉移至固相支持物,
與特異性抗體結合后,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色、放射自顯影或
化學反光燈多種方法從混合蛋白中檢測出目標蛋白,從而定性或定量生物樣本中目標蛋白的
表達情況。
技術優勢
兼具SDS-PAGE的高分辨率和固相免疫測定的高特異性以及敏感性,
目前已成為蛋白質檢測的經典方法之一。
實驗流程
樣品要求
1.樣本 :
盡可能新鮮;
樣本量:
細胞樣本,質量大于100mg;
組織樣本, 細胞數大于1×10的6次方;
2.抗體:
客戶可以自備,也可以委托我公司代買。為保證服務質量,
我們承諾,抗體為品質最好的進口抗體。
樣品制備須知
懸浮細胞: 取大約1×10的7次方個細胞,低速離心收集,棄用培養液,加入1mlPBS懸浮細胞,
轉入小離心管中,低速離心沉淀細胞,棄用PBS,放入-70℃冰箱保存。然后干冰運輸。
貼壁細胞:取大約1×10的7次方個細胞,胰酶消化后加入PBS懸浮細胞,低速離心收集,棄去
液體,加入1mlPBS懸浮細胞,轉入小離心管中,低速離心沉淀細胞,棄用PBS,放入-70℃冰箱保存。
然后干冰運輸。
組織:采集新鮮組織(生物體死亡后10分鐘內取材料并保存好),組織塊以PBS
或生理鹽水清洗干凈,切成小塊,放入液氮或-70℃冰箱保存。然后干冰運輸。
市內細胞樣品可直接運送,運送時在培養瓶中裝滿培養液,并以封口膜封好,建議凍存后運輸。
取樣和存樣所用凍存管、離心管、吸頭等必須高溫滅菌。所有存樣管口需以封口膜封好。
如有特別要求,可直接與本公司取得聯系。
我們為您提供
實驗方法、步驟、所用試劑(包括抗體)、儀器、膠片和圖片等相關分析數據。
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