技術概述
“乙?;?rdquo;是改變蛋白質功能主要的修飾方式之一,最初發現它在組蛋白上比較豐富,主要調控基因的轉錄。蛋白質在執行生命復雜的調控和信息傳遞功能過程中,需要在蛋白質分子鏈上接上某種分子或分子團,以改變蛋白質的功能,稱之為“蛋白質的修飾”。如果蛋白質的分子鏈上嫁接上一個乙?;肿?,則稱為“乙?;?rdquo;修飾。修飾后的蛋白質可以對細胞內的各類通路進行精確的調節與控制。
乙酰類修飾的研究已經有40年的歷史,但是研究一直停滯不前。這主要與乙?;鞍踪|比較隱蔽,不容易被發現有關。2009年,復旦大學研究團隊通過通量化的蛋白質研究和不同物種的代謝通路研究,成功發現了大量非細胞核的乙?;鞍踪|。在他們研究之前,人類在人體肝臟細胞中僅僅發現了76個乙?;鞍踪|,他們的研究發現了超過1000個乙?;鞍踪|。
從76個到1000多個,當中900多個“新發現”好似一片“新大陸”,帶出一系列有關乙?;鞍踪|革命性的研究成果,其中最重要的成果就是研究團隊首次在全世界發現,乙?;瘜Υx的調控功能,這種代謝功能的載體就是蛋白質中的負責能量轉化的酶。
2010年2月19日出版的國際權威期刊《科學》雜志同時發表了兩篇復旦大學IBS生物醫學研究院的研究成果,并配發評論認為,中國科學家進行的這項研究,開辟了生命代謝研究的新領域,為開發調控代謝的藥物研究提供了新的思路,為包括腫瘤在內新的治療手段發展提供了可能。而且,細胞蛋白、代謝酶等大量非細胞核蛋白的乙?;揎?,都是在研究中首次得到確認。
技術路線
HPLC-ESI-MS和2DE-MALDI-MS是蛋白質鑒定研究中的兩條經典路線,互有補充,各有優劣,目前已經廣泛應用在各種蛋白質翻譯后修飾鑒定研究中,這兩種方法不僅能夠鑒定到后修飾蛋白,而且能夠具體到修飾位點信息,如今已經成功應用在
磷酸化修飾和
糖基化修飾中。目前技術人員通過結合兩種方法,ESI-MS/MALDI-MS在鑒定乙?;鞍准捌湫揎椢稽c信息方面有著不同的顯現,這也為乙?;芯刻峁┝朔椒ㄕ撘饬x上的啟示。
樣品準備
樣本 |
送樣要求(具體送樣前咨詢公司技術人員) |
蛋白 |
每組樣品2000 µg ,重復的話翻倍,一般建議客戶準備兩份樣品備用。 |
組織 |
不同物種,組織的蛋白提取量有差異,以能提取得到2000 ug 蛋白為標準。 |
細胞 |
107個細胞,胰酶消化,按細胞凍存標準離心收集細胞即可。 |
體液 |
血清 300µL以上,腦脊液200µL 以上,尿液1mL ,淚液 1mL3. |
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